如何更好的獲得細(xì)菌基因組DNA/RNA？慧慶實(shí)驗(yàn)成果分析
時(shí)間：2023-09-14 15:59:36 來源：洛陽慧慶生物科技有限公司
核酸是重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)的主要研究對(duì)象之一。利用核酸提取試劑提取細(xì)菌基因組DNA/RNA可用于PCR擴(kuò)增、分子雜交、核酸檢測分析、基因突變檢測和測序等，而核酸提取的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性影響很大。那么如何更好的獲得細(xì)菌基因組DNA/RNA？慧慶生物結(jié)合具體的實(shí)驗(yàn)成果為大家分析一下。
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
用自動(dòng)核酸提取純化儀能夠成功提取細(xì)菌基因組DNA，并獲得較好的電泳條帶。
2.實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
儀器：臺(tái)式離心機(jī)（SIGMA）、超微量分光光度計(jì)（Q5000）、電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-7C型）、自動(dòng)核酸提取儀（LJbio32H）
試劑：細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（磁珠法、預(yù)分裝）
3.實(shí)驗(yàn)方法
（1）樣本處理：取過夜培養(yǎng)的細(xì)菌100～1000 μL（細(xì)胞數(shù)為108-109）至1.5 mL 離心管中10000g離心2min，吸棄上清，再加入200 μL EB重懸菌體備用。
（2）按照試劑盒說明書手工操作，提取細(xì)菌基因組DNA。
（3）優(yōu)化自動(dòng)核酸提取純化儀的上機(jī)參數(shù)（①65℃裂解，8min ②65℃裂解，10min ③室溫裂解，10min）。
（4）用超微量分光光度計(jì)測量提取的DNA，并進(jìn)行電泳檢測。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
（1）在超微量分光光度計(jì)上用EB潤洗點(diǎn)點(diǎn)空白，取1-2 μl的洗脫產(chǎn)物檢測，記錄各個(gè)波長的吸光度，得到的數(shù)據(jù)如下：
備注：加底紋的電泳
（2）在1%的瓊脂糖凝膠上加入6μL洗脫的基因組DNA/擴(kuò)增產(chǎn)物/DNA Marker進(jìn)行電泳，結(jié)果如下：
M：DL2000Ladder
1:65℃裂解，8min；2-3: 65℃裂解，10min；4-5: 常溫10min
5.分析與討論
（1）由濃度測量結(jié)果和產(chǎn)物電泳圖可知，三種提取條件下純度與純度稍有差異，室溫裂解條件下，電泳結(jié)果點(diǎn)樣孔有滯留，裂解效果比其他兩種稍差，但也有明顯DNA帶與兩條RNA條帶。
（2）電泳圖編號(hào)4 的DNA條帶略暗，與測量結(jié)果也能對(duì)應(yīng)起來，分析原因是提取所用耗材此孔位對(duì)應(yīng)的磁棒套稍長一點(diǎn)，儀器提取過程中磁棒套攪拌過程中影響其裂解效果，導(dǎo)致此孔提取核酸測量值與電泳結(jié)果稍差。
（3）對(duì)比三種程序提取效果，65℃裂解8min的測量值較均一，重復(fù)性較好，DNA條帶最亮。
如何更好的獲得細(xì)菌基因組DNA/RNA？看了以上的實(shí)驗(yàn)過程以及結(jié)果分析，相信大家已經(jīng)有了更深入的認(rèn)識(shí)。洛陽慧慶生物生產(chǎn)的細(xì)菌基因組DNA提取試劑（磁珠法）核酸提取成功率更高、價(jià)格適中，受到高校及科研單位用戶的好評(píng)。如您有相關(guān)疑問或者采購需求，請(qǐng)留言或者電話聯(lián)系我們。
實(shí)驗(yàn)論證：如何更好的獲得細(xì)菌基因組DNA/RNA
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
用自動(dòng)核酸提取純化儀能夠成功提取細(xì)菌基因組DNA，并獲得較好的電泳條帶。
2.實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
儀器：臺(tái)式離心機(jī)（SIGMA）、超微量分光光度計(jì)（Q5000）、電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-7C型）、自動(dòng)核酸提取儀（LJbio32H）
試劑：細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（磁珠法、預(yù)分裝）
3.實(shí)驗(yàn)方法
（1）樣本處理：取過夜培養(yǎng)的細(xì)菌100～1000 μL（細(xì)胞數(shù)為108-109）至1.5 mL 離心管中10000g離心2min，吸棄上清，再加入200 μL EB重懸菌體備用。
（2）按照試劑盒說明書手工操作，提取細(xì)菌基因組DNA。
（3）優(yōu)化自動(dòng)核酸提取純化儀的上機(jī)參數(shù)（①65℃裂解，8min ②65℃裂解，10min ③室溫裂解，10min）。
（4）用超微量分光光度計(jì)測量提取的DNA，并進(jìn)行電泳檢測。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
（1）在超微量分光光度計(jì)上用EB潤洗點(diǎn)點(diǎn)空白，取1-2 μl的洗脫產(chǎn)物檢測，記錄各個(gè)波長的吸光度，得到的數(shù)據(jù)如下：
表1 核酸提取純化儀提取結(jié)果
|
序號(hào) |
A260/A280 |
A260/A230 |
Conc(ng/μL) |
備注 |
|
1． |
1.98 |
1.51 |
186.6 |
65℃8min4級(jí) |
|
2． |
1.95 |
1.42 |
183.7 |
|
|
3． |
1.92 |
1.39 |
163.3 |
65℃10min4級(jí)
|
|
4． |
2.02 |
1.69 |
150.1 |
|
|
5． |
1.76 |
0.95 |
176.9 |
室溫10min4級(jí)
|
|
6． |
1.89 |
1.24 |
380.6 |
（2）在1%的瓊脂糖凝膠上加入6μL洗脫的基因組DNA/擴(kuò)增產(chǎn)物/DNA Marker進(jìn)行電泳，結(jié)果如下：
1:65℃裂解，8min；2-3: 65℃裂解，10min；4-5: 常溫10min
5.分析與討論
（1）由濃度測量結(jié)果和產(chǎn)物電泳圖可知，三種提取條件下純度與純度稍有差異，室溫裂解條件下，電泳結(jié)果點(diǎn)樣孔有滯留，裂解效果比其他兩種稍差，但也有明顯DNA帶與兩條RNA條帶。
（2）電泳圖編號(hào)4 的DNA條帶略暗，與測量結(jié)果也能對(duì)應(yīng)起來，分析原因是提取所用耗材此孔位對(duì)應(yīng)的磁棒套稍長一點(diǎn)，儀器提取過程中磁棒套攪拌過程中影響其裂解效果，導(dǎo)致此孔提取核酸測量值與電泳結(jié)果稍差。
（3）對(duì)比三種程序提取效果，65℃裂解8min的測量值較均一，重復(fù)性較好，DNA條帶最亮。
如何更好的獲得細(xì)菌基因組DNA/RNA？看了以上的實(shí)驗(yàn)過程以及結(jié)果分析，相信大家已經(jīng)有了更深入的認(rèn)識(shí)。洛陽慧慶生物生產(chǎn)的細(xì)菌基因組DNA提取試劑（磁珠法）核酸提取成功率更高、價(jià)格適中，受到高校及科研單位用戶的好評(píng)。如您有相關(guān)疑問或者采購需求，請(qǐng)留言或者電話聯(lián)系我們。
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